共創共贏
草甘膦（Glyphosate，Gly）是廣泛使用的一類廣譜非選擇性除草劑，以其、廉價等特性被運用于各個農業和非農業領域。其在環境和生物體中富集并通過食品進入人體，會對人體健康造成危害。隨著其在茶葉上的廣泛使用，草甘膦及其主要代謝產物氨甲基膦酸殘留問題也越來越受關注。目前常用的檢測方法為離子交換凈化、七氟丁醇（HFB）和三fu乙酸酐（TFAA）衍生后GC-MS檢測，或9－芴基甲基三氯甲烷衍生后LC-MS/MS檢測，這些方法通常存在操作時間長、需要衍生等問題，因此建立一種簡便、快捷、有效的草甘膦及其代謝物殘留的檢測方法具有重要的意義。
迪馬科技在參考各種標準及文獻的基礎上，建立了SPE-UPLC-MS/MS法測定茶葉中草甘膦及其代謝物氨甲基膦酸的檢測方法，采用水提取， ProElut GLY固相萃取柱凈化樣品，收集流出液，Polyamino HILIC色譜柱分離檢測。方法定量限0.1mg/kg。該方法特點：1）前處理步驟少，提取液直接通過凈化柱接收流出液即可；2）有機溶劑消耗量小，前處理過程中也無需使用酸堿試劑；3）儀器分析簡單，樣品無需衍生直接分析可提高結果穩定性及減少實驗成本。本方法適用于綠茶、花茶、鐵觀音、紅茶和普洱茶中氨甲基膦酸和草甘膦的檢測。可供廣大分析工作者參考。
1、標準品配制
單標標準儲備液：準確稱取各標準品，用水配制成1000 ug/mL的單標標準儲備液。
混標標準中間液：分別吸取各單標標準儲備液，用水配制成1.0 ug/mL、10 ug/mL和50 ug/mL的混標標準中間液。
2、提取
取1 g茶葉于50 mL離心管中，準確加入10 mL水、10 mL二氯甲烷，振蕩10 min，超聲10 min，8000 rpm離心5 min，取5 mL上清液，待凈化。
3、凈化
ProElut GLY 6mL (Cat#:65938）
(1)活 化： | 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，棄去流出液； |
(2)上 樣： | 將待凈化液加入柱中，棄去前3 mL流出液，收集后2 mL流出液，混勻，濾液過0.22 um尼龍濾膜，上機分析。 |
注：同方法制備基質匹配標準溶液。
1 UPLC 條件：
色譜柱：Polyamino HILIC，150×2.0 mm，5 μm (Cat#：99302)
流 速：0.2 mL/min 進樣量：10 μL 柱 溫：35 ℃
流動相： A：乙腈 B：5 mM乙酸銨溶液，氨水調節至pH=11
梯度設置：
Time（min） | 0 | 2 | 2.1 | 8 | 8.1 | 15 |
A（%） | 80 | 80 | 20 | 20 | 80 | 80 |
B（%） | 20 | 20 | 80 | 80 | 20 | 20 |
2.質譜條件：
電離模式：ESI 掃描方式：負離子掃描
檢測方式：多反應監測 電噴霧電壓：-4500 V
霧化氣壓力：60 psi 輔助氣壓力：60 psi
氣簾氣壓力：35 psi 離子源溫度：550 ℃
定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量及去簇電壓見下表
目標化合物 | 定性離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 定量離子對 （m/z） (母離子/子離子) | 碰撞氣能量/eV | 去簇電壓/V |
氨甲基膦酸 | 109.9/62.8 | 109.9/62.8 | -23 | -53 |
109.9/78.9 | -35 | -51 | ||
草甘膦 | 167.8/62.8 | 167.8/62.8 | -30 | -50 |
167.8/81.0 | -21 | -31 |
添加回收結果
茶葉中氨甲基膦酸和草甘膦的LC-MS/MS檢測添加回收結果：
樣品 基質 | 回收率（%） | |||||
添加水平：0.1 mg/kg | 添加水平：1 mg/kg | 添加水平：5 mg/kg | ||||
加標量：1.0 μg/mL，加100 μL | 加標量：10 μg/mL，加100 μL | 加標量：50 μg/mL，加100 μL | ||||
氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | 氨甲基膦酸 | 草甘膦 | |
綠茶 | 103 | 91 | 99 | 109 | 92 | 101 |
花茶 | 95 | 105 | 109 | 85 | 93 | 99 |
鐵觀音 | 84 | 81 | 83 | 94 | 80 | 100 |
紅茶 | 100 | 101 | 86 | 85 | 89 | 98 |
普洱茶 | 80 | 95 | 89 | 95 | 88 | 102 |
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